| 品牌 | 弦华生物 | 产地类别 | 国产 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 综合 |
弦华生物SpCas9 蛋白
货号:GB0010
英文名称:SpCas9 Recombinant Protein
产品规格:50 pmol 250 pmol 100 pmol 1000 pmol
【产品介绍】
来源：通过E.coli重组、表达、纯化而获得，表达基因来源于Streptococcus pyogenes。在其编码蛋白的 N 端含有猴病毒 40（SV40）核定位序列（NLS），同时带有 10*His 标签。
用途：体外筛选高效gRNA序列、特定双链DNA在gRNA引导下的剪切、含有特定序列双链DNA的选择性线性化等。
纯度：不含DNA外切酶，不含非gRNA依赖的DNA内切酶，不含RNA酶。
浓度：1μM(158ng/μl)。
【注意事项】（操作前仔细阅读）
1. 本产品使用时会涉及sgRNA和DNA的操作，必须注意RNase-free和DNase-free的相关操作。所有自行准备的试剂和耗材也都应是Nuclease-free的。如果可能有核酸酶污染，可考虑用0.01%的DEPC处理过夜，然后高温高压处理后使用。操作时建议戴一次性口罩操作。
2. 对于操作环境中核酸酶的去除，推荐使用RNase and DNase接触面上的核酸酶。反应体系中推荐加入以去除实验桌、仪器设备等表面或其它RNase Inhibitor以保护RNA不被降解。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
【使用说明】
1. 溶解并混匀体外消化反应所需的各种溶液。将SpCas9、sgRNA、底物DNA置于冰浴上，使用无核酸酶水稀释sgRNA至300nM，底物DNA至30nM。
2. 按照下表配制反应体系(以30μl Reagent体系为例)：
试剂 | 体积（μl） |
Nuclease-free Water | 20 |
SpCas9 Reaction Buffer(10X) | 3 |
sgRNA (300nM) | 3 |
SpCas9(1μM) | 1 |
总反应体积 | 27 |
3. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微涡旋混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。25℃预孵育10min。
4. 加入3μl 30nM底物靶DNA(30μl最终体积)，轻轻混匀(用移液器轻轻吹打混匀或用涡旋混合器在速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体，37℃孵育15min，反应时间可以根据实际情况适当延长至例如30-120min。
5. 每个样品中加入1μl蛋白酶K，轻轻混匀，室温孵育10min。
每个反应体系中加入 DNA上样缓冲液，然后使用适当浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分析。如果不立即电泳，可以-20ºC保存备用。
【存储及保存】
酶储存溶液：10mM Tris, 300mM NaCl, 0.1mM EDTA,1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol, pH7.4 25ºC。
Cas9 Reaction Buffer(10X): 500mM Tris-HCl, 1M NaCl, 100mM MgCl2, 1mg/ml BSA, pH7.9 25ºC
弦华生物SpCas9 蛋白【存放说明】
-20ºC保存，至少一年有效。可以分装后在-80ºC长期保存。
